pcr聚合酶链式反应

pcr聚合酶链式反应不是一步到位的，那么pcr聚合酶链式反应步骤是什么呢？

实验器具与材料：移液枪：200ul、10ul；吸头：200ul、20ul；吸头台：放置200ul和20ul的吸头一个；EP管1.5ml、100ul；塑料制品：（包括吸头、EP管等）送至高压3次，试验前将枪头放入吸头台。双蒸水100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水，送至高压，后分装到几个1。5mlEP管中，-20℃中保存备用。

然后准备100ul EP管，依次在管中加入50ul反应体系），稍离心,100℃沸水浴1分钟,趁热加入Tag酶0.5ul（冰上操作）,再加入50ul液体石蜡封闭,10000rmp离心1分钟,进行40个循环，然后72℃10min 完后4℃保温。10000rmp离心5min，将下层水相转入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。

聚合酶链式反应有pcr的方面，那么pcr聚合酶链式反应的原理和操作是什么呢？

pcr聚合酶链式反应的原理和操作：将聚合酶链式反应反应体系升温至95℃左右，双链的DNA模板就解开成两条单链，此过程为变性。然后将温度降至引物的Km值以下，3端与5端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合，此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时，耐热的Taq DNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的3端，形成新生的DNA链。

每一次循环使反应体系中的DNA分子数增加约一倍。理论上循环几次，就增加为2^n倍。当经30次循环后，DNA产量达2^30拷贝，约为10^9个拷贝。由于实际上扩增效率达不到2倍，因而应为(1+R)^n，R为扩增效率。

某些领域需要pcr聚合酶链式反应的，那么pcr聚合酶链式反应有哪些呢？

pcr聚合酶链式反应有模板核酸。用于聚合酶链式反应的模板核酸可以是DNA，也可以是RNA。当用RNA作模板时，首先要进行反转录生成cDNA，然后再进行正常的聚合酶链式反应循环。核酸模板来源广泛，可以从培养细胞、细菌、病毒、组织、病理标本、考古标本等中提取。

pcr聚合酶链式反应还有引物。引物决定聚合酶链式反应扩增产物的特异性与长度。因此，引物设计决定聚合酶链式反应的成败。

pcr聚合酶链式反应还有耐热的TaqDNA聚合酶。1976年Chien分离出热稳定聚合酶，1986年Erlich分离并纯化了适于聚合酶链式反应的Tq热稳定性聚合酶，为聚合酶链式反应成为实用技术奠定了基础，现已用基因重组生产。

pcr聚合酶链式反应看情况用的，对于pcr聚合酶链式反应名词解释是什么呢？

pcr聚合酶链式反应又称体外基因放大技术，是用DNA聚合酶在体外系统中诱发一对引物间的DNA双链的合成过程。经过20～30次循环后，可使目的基因片段成百万倍地扩增，使得对该基因片段的分析研究更为便利。PCR技术自1985年创立以来，经过不断改进，目前已成为分子生物学研究的重要手段。PCR技术已经应用于遗传病的基因诊断和产前诊断，病原体的鉴定，癌基因的分析研究等。最突出的是经PCR放大后的DNA片段可以直接进行顺序分析。

本身DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。