聚合酶链式反应原理

聚合酶链式反应原理和过程不会很复杂，那么聚合酶链式反应原理和过程什么样呢？

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

而DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。

聚合酶链式反应最终还是用于生活，那么聚合酶链式反应原理及其应用有哪些呢？

聚合酶链式反应广泛地用于分子生物学的各个领域。聚合酶链式反应不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。

聚合酶链式反应原理为DNA的复制。聚合酶链式反应(PCR)是一种简单，专一，灵敏，快速的扩增特定DNA的方法，但标准PCR方法的功能局限于定性扩增，其原因在于PCR的前阶段产物按指数方式扩增，产物增长呈直线，在此阶段目标扩增产物的累积量还相当低，尚不能用荧光染色剂、如溴乙锭对电泳后的条带作准确的定量测定。

聚合酶链式反应有时会出现假阴性，对于聚合酶链式反应原理和特点有哪些呢？

聚合酶链式反应原理和特点是体外快速DNA复制，还有就是聚合酶链式反应有五要素，即参加PCR反应的物质主要有五种即引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+)。

当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，聚合酶链式反应引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。

聚合酶链式反应基于DNA研发的，那么聚合酶链式反应原理及功能是什么呢？

聚合酶链式反应原理就是DNA的半复制情况，聚合酶链式反应原理中用Taq酶进行聚合酶链式反应扩增，一般只能扩增小于400bp的DNA片段，经过对酶的结构与功能的改造，以及聚合酶链式反应方法学的改进，现已能扩增20kb以上的DNA分子。聚合酶链式反应目前广泛地用于分子生物学的各个领域。

本身DNA在细胞中的复制是―个比较复杂的过程。参与复制的基本因素有：DNA聚合酶、DNA连接酶、DNA模板、由引发酶合成的RNA引物、核苷酸原料、无机离子、合适的pH、以及解开DNA的超螺旋及双螺旋等结构的若干酶与蛋白质因子等。