rna聚合酶链式反应

rna聚合酶链式反应主要检查的是RNA，那么rna聚合酶链式反应是什么来的呢？

RNA的聚合酶链式反应：目前常用的RNA检测方法有原位杂交，点杂交，Northern印记杂交以及核酸酶保护试验等。这些方法的普遍缺点是难以检测低丰度的信使RNA，并且操作繁琐，将RNA反转录和PCR结合起来建立RNA聚合酶链式反应（RT-PCR）则可以克服上述缺点。

其实人体一个细胞含RNA约10pg（含DNA约7pg）。与DNA相比，RNA种类繁多，分子量较小，含量变化大。RNA可根据结构和功能的不同分为信使RNA和非编码RNA。非编码RNA分为非编码大RNA和非编码小RNA。非编码大RNA包括核糖体RNA、长链非编码RNA。非编码小RNA包括转移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA（20~300nt）包括 miRNA、 SiRNA、 piRNA、scRNA、 snRNA、 snoRNA等，细菌也有小分子RNA（50~500nt）。

RNA方面有rna聚合酶链式反应技术，那么rna聚合酶链式反应技术什么样呢？

rna聚合酶链式反应技术先在反转录酶的作用下以信使RNA为模板合成cDNA，再以CDNA为模板进行PCR反应。此法快速，简便，并且灵敏度高。rna聚合酶链式反应技术可以检测单个细胞中少于10个拷贝的特异RNA。

任何生物大分子都有结构的多样性和特异性。RNA的结构特异性主要体现在组成RNA的单体——核糖核苷酸的数目和排列顺序上。比如某段RNA含有100个核糖核苷酸，它的多样性可以达到4的100次方；但每一种RNA只有一种结构，这就是它的特异性。就像班里有50个学生，排位时第一个学生有50中选择，第二个学生有49个选择，以此类推，班里排位的方式可以多达50的阶乘，这就是多样性；但现实中班里的位次就是眼前这一种，这就体现了特异性。

RNA跟DNA的机制是不太一样的，其中rna聚合酶链式反应的原理是什么呢？

rna聚合酶链式反应的关键步骤是RNA的反转录，要求RNA模板必须是完整。并且不含DNA，蛋白质等杂质。若RNA模板中污染了微量DNA，扩增后会出现特异DNA的PCR产物。而cDNA扩增产物却很少，必要时可用无ＲＮａｓｅ的ＤＮａｓｅ处理反转录产物，消除ＤＮＡ后在进行ＰＣＲ。如果蛋白质未除尽可与ＲＮＡ结合，从而影响反转录和ＰＣＲ反应。

目前转移RNA（tRNA）在蛋白质合成过程中负责转运氨基酸、解读mRNA遗传密码。tRNA占细胞总RNA的10%~15%，绝大多数位于细胞质中。tRNA由Crick于1955年提出其存在，Zamecnik和 Hoagland于1957年鉴定。

rna聚合酶链式反应操作得当才准确，那么rna聚合酶链式反应操作过程是什么呢？

rna聚合酶链式反应定量方法包括PCR反应和转录反应二个步骤，二个步骤相互接续，可以只用一个试管来完成，先用PCR来扩增目标基因，但PCR循环数比通常少5-10个循环，虽然此时反应液中扩增产物的总量较少，不能直接用通常的核酸染色剂来定量测定，但因为PCR反应仍处在直线阶段未进入平坡期，所以扩增产物总量与样品中原始模板的数量成正比例。其在于用转录反应使PCR扩增产物进一步按线性增加的方式合成RNA。这一设想能付之实现的基础是发现PCR反应液的必要成份脱氧核糖核苷酸，正，反引物和DNA聚合酶等在相当宽的浓度范围内对转录反应没有可测见的显著影响。

所以，在完成PCR反应后可以不经过任何分离步骤而进入转录反应。在RNA聚合酶和核糖核苷酸底物过量，反应温度和时间固定的条件下，RNA的合成量与转录反应的模板数量，即PCR扩增产物的数量成正比例，所以，最终合成的RNA量反映了样品中原始模板DNA的数量。由转录反应合成的RNA量可达到模板数量的几百至千倍，从而可以方便地用溴乙锭或其他核酸染色剂定量测定。