逆转录聚合酶链式反应通常在实验室进行,那么逆转录聚合酶链式反应实验目的是什么呢?
逆转录聚合酶链式反应实验目的就在于获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级,使一些极为微量RNA样品分析成为可能。
注意逆转录聚合酶链式反应在实验过程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在总RNA的提取过程中,注意避免mRNA的断裂。为了防止非特异性扩增,必须设阴性对照。逆转录聚合酶链式反应内参的设定主要为了用于靶RNA的定量。常用的内参有G3PD(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)、β-Actin(β-肌动蛋白)等。其目的在于避免RNA定量误差、加样误差以及各PCR反应体系中扩增效率不均一各孔间的温度差等所造成的误差。