聚合酶链式反应这项技术已经相对完善,那么聚合酶链式反应的原理及技术怎么样呢?
聚合酶链式反应的原理就是DNA的半保留复制。聚合酶链式反应反应中变性这一步很重要,若不能使模板DNA和聚合酶链式反应产物完全变性,聚合酶链式反应反应就不能成功,DNA分子中G+C含量愈多,要求的变性温度愈高。太高的变性温度和时间又会影响Taq酶的活性,通常的变性温度和时间分别为95℃、30s,有时用97℃、15s。
虽然DNA链在变性温度时两链分离只需几秒钟,但反应管内部达到所需温度还需要一定的时间,团此要适当延长时间。为了保证模板DNA能彻底变性.最好为7-10min,然后在以后的循环中,将变性步骤设为95℃/min。